細(xì)胞制備流程及轉(zhuǎn)化方法
1. 轉(zhuǎn)移0.2-1ml培養(yǎng)物至裝有500ml LB(或其他營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基)的1-2升搖瓶
2. 37°C下劇烈振蕩培養(yǎng)2-6小時(shí)
3. 定時(shí)監(jiān)控OD600值(培養(yǎng)1小時(shí)后每半小時(shí)測定一次)
4。 當(dāng)OD600值達(dá)到0.5-1.0時(shí)，從搖床中取出搖瓶，置于冰上冷卻至少15分鐘(需要的話這種方式可以存放培養(yǎng)液數(shù)小時(shí))
5. 細(xì)胞在4°C 5000g下離心15分鐘，棄上清液(如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一兩天)
6. 用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞。先用渦旋儀或吸液管重懸浮細(xì)胞于少量體積中(幾毫升)，然后加水稀釋至離心管的2/3體積。
7. 照上面步驟重復(fù)離心，小心棄去上清液
8. 照上面步驟用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞
9. 離心，棄上清液
10. 用20ml滅菌的、冰冷后的10%甘油重懸浮細(xì)胞
11. 照上面步驟離心，小心棄去上清液(沉淀可能會很松散)
12. 用10%甘油重懸浮細(xì)胞至zui終體積為2-3ml
13. 將細(xì)胞按150μl等份裝入微量離心管，于-80°C保存
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